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簡(jiǎn)要描述:無漿體通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:benzimidazole*:20033-99-2分子量: C9H10N2O2正丁 134.22 Butyl benzene*:104-51-8分子量: C10H14; C6H5(CH2)32-溴-3,5-二氯吡 226.88 2- -3,5- two*:14482-51-0分子量: C5H2BrCl2N
詳細(xì)介紹
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
無漿體通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格 | Anaplasma spp.PCR | BK-P8790 |
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
?
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
鬼臼素-4-O-葡萄糖苷 CAS 16481-54-2 * 規(guī)格: 10mg
L-羥脯氨酸 CAS 51-35-4 * 規(guī)格: 20mg
雷公藤乙素 CAS 38647-10-8 * 規(guī)格: 20mg
喬松素 CAS 480-39-7 * 規(guī)格: 20mg
鳶尾黃素 CAS 548-77-6 * 規(guī)格: 20mg
原百部堿 CAS 27495-40-5 * 規(guī)格: 10mg
月桂氮卓 CAS 59227-89-3 * 規(guī)格: 50mg
五味子(北五味子)對(duì)照藥材 CAS * 規(guī)格: 1g
玄參對(duì)照藥材 CAS * 規(guī)格: 1g
三尖杉寧堿 CAS 71610-00-9 * 規(guī)格: 20mg
羅紅 CAS 80214-83-1 * 規(guī)格: 200mg
哈巴俄苷 CAS 19210-12-9 * 規(guī)格: 20mg
淡豆豉對(duì)照藥材 CAS * 規(guī)格: 1g
巨大戟醇 CAS 30220-46-3 * 規(guī)格: 20mg
骨化二醇 CAS 63283-36-3 * 規(guī)格: 20mg
無漿體通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格氯酮 Chlorine rat 374.82分子量: C23H15ClO3*:3691-35-8
銀杏內(nèi)酯J Ginkgo biloba J 424.39856分子量:C20H24O10*:107438-79-9
4-(3-三氟) 4- (3- three trifluoromethyl phenyl) piperidine hydrochloride 265.7分子量: C12H15ClF3N*:6652-16-0
2-溴-5-氯吡 192.44 2- -5- chloride*:40473-01-6分子量: C5H3BrClN
尼扎替丁 Nizatidine 331.46分子量: C12H21N5O2S2*:76963-41-2
乙氯吡 143.61 Ethyl chloride*:2294-38-4 分子量: C7H10ClN
2-甲-3-溴吡 172.02 2- methyl -3-*:38749-79-0分子量: C6H6BrN
甲巰噻二唑 132.21 Tapasin Thiadiazolen two triazole*:29490-19-5分子量: C3H4N2S2
2-羥甲-5-甲氧并咪唑 178.19 2- hydroxy -5- methoxy methyl benzimidazole*:20033-99-2分子量: C9H10N2O2
正丁 134.22 Butyl benzene*:104-51-8分子量: C10H14; C6H5(CH2)3
2-溴-3,5-二氯吡 226.88 2- -3,5- two*:14482-51-0分子量: C5H2BrCl2N
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