詳細介紹
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
貝氏貝諾孢子蟲PCR檢測試劑盒價格 | Besnoitia besnoitiPCR | BK-P8874 |
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯 CAS 218916-52-0 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
知母皂苷B CAS 139051-27-7 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
路路通酸 CAS 4481-62-3 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
人參皂苷F1 CAS 53963-43-2 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
圣草素-7-0-葡萄糖甙 CAS * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
新橙皮苷二氫查爾 CAS 20702-77-6 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
桂酸 CAS 140-10-3 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
柴胡皂苷C CAS 20736-08-7 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
紅花苷I CAS 94238-00-3 * 規(guī)格: HPLC≥97%;20mg
表沒食子兒茶素 CAS 970-74-1 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
芹菜素 CAS 520-36-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
防己諾林堿 CAS 33889-68-8 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
秦皮素 CAS 574-84-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
胸腺 CAS 65-71-4 * 規(guī)格: 20mg
苦瓜苷A CAS 75801-95-5 * 規(guī)格: 10mg
貝氏貝諾孢子蟲PCR檢測試劑盒價格聯 154.21 Biphenyl*:92-52-4分子量: C12H10
3--4-甲氧三氟甲 191.15 3- amino -4- three f*:349-65-5分子量: C8H8F3NO
三環(huán)唑 189.24 Three ring*:41814-78-2分子量: C9H7N3S
N,N'-雙(水醛縮)乙二胺鐵 322.15 N, N'- bis (salicylidene) ethylenediamine iron*:14167-12-5分子量: C16H14FeN2O2
過氧雙(2,4-二氯甲酰) 380.1 Peroxide bis (2,4- two)*:分子量: C14H6O4CL4
4-羧-2,2,6,6-四甲1-氧自由 200.26 4- -2,2,6,6- four 1- carboxyl methyl piperidine oxygen radicals*:37149-18-1分子量: C10H18NO3
天青A Azure A 625.68分子量: C16H18N3S · C15H1<*:37247-10-2
健那綠 Health that green 511.06分子量: C30H31ClN6*:2869-83-2
Hanks’BalancedSalts Hanks equilibrium salt 分子量:*:N#A2968
氯鋰 60.41 Lithium chloride*:16712-20-2分子量: ClH2LiO
二氫石蒜堿 Two Shi Suanjian 289.32636分子量:C16H19NO4*:6271-21-2
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