注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

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消化鏈球菌通用PCR檢測試劑盒價格葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：GLUT1

谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶1樣蛋白1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：GOT1L1

生長激素釋放因子受體抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：GHRHR

血管壁相連蛋白樣蛋白1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：GPBP1L1

葡萄糖氧化酶抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Glucose Oxidase

轉(zhuǎn)錄因子Gli2抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：Gli2

膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α2抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：GDNF Receptor alpha 2

人乙型肝炎e抗原單克?。z測）抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：HBeAg(2E6)

同源盒蛋白HOXA11抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：HOXA11

HER2受體抗體(N端) 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：HER2 receptor(NT)

人瘤病毒16型L2抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：HPV16 L2

單純皰疹病毒1型DNA聚合酶催化亞單位抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：HHV11 DNA polymerase catalytic subunit

滋養(yǎng)層細(xì)胞抗原3β7抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：HSD3B7

磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱：Phospho-HSL (Ser863)

亨廷頓(舞蹈癥)相互作用蛋白1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱：HIP1

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。