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糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法

簡(jiǎn)要描述:糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:布氏瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Brucella Agar250克彎曲桿菌的抗生素敏感性試驗(yàn)和純化培養(yǎng)布氏肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)Brucella Broth250克用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂的制備紅四氮唑沙保羅進(jìn)口、國產(chǎn)TTC-Sabourand,s Medium250克用于分離真菌,酵母菌等三苯四唑瓊脂基礎(chǔ)進(jìn)口、國產(chǎn)TTC Agar Base250克彎曲桿菌

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-23
  • 訪  問  量:706

詳細(xì)介紹

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱:糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣

檢測(cè)方法:微量法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6984

產(chǎn)品分類:糖原系列
商品介紹:

測(cè)定意義:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和無活性的糖原磷酸化酶bGPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。

測(cè)定原理:

GP催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GPGPaGPb)活性,未添加腺苷酸(5-AMP)時(shí)測(cè)定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

2 ug pBKS pBKS 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

100mL DNEDTA溶液,0.5M,PH8.01   

2 ug pFastBac-Dual pFastBac-Dual 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

硫乙醇酸鹽流體(顆粒)  250g

1瓶 Ca759細(xì)胞株 Ca759 低溫運(yùn)輸和保存

細(xì)菌總數(shù)顯色 Total Genes Chromogenic Medium 250g

100U Sulfolobus DNA 聚合 IV Sulfolobus DNA Polymerase IV -20℃保存

強(qiáng)化梭菌(RCM) Reinforced Clostridium Medium 250g

200mL 自誘導(dǎo)液體(arab啟動(dòng)子)  

2 ug pOG2-cre pOG2-cre 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

NT NT Medium 250g

糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法TSPAN12/NET-2  四分子交聯(lián)體12抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2ml

FLT-3/CD135  FMS樣酪激3 規(guī)格: 0.2ml

DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus)  穿膜蛋白DLK1抗體(C端) 0.1ml

WIF1  Wnt信號(hào)抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-human IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Cyclin L/CCNL1  周期素L抗體 規(guī)格: 0.2ml

PLK4/STK18  絲/蘇蛋白激18 規(guī)格: 0.2ml

C15orf41  15號(hào)染色體開放閱讀框41抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771)  磷酸化磷酯Cγ1抗體 規(guī)格: 0.1ml

EDNRB  內(nèi)皮素受體B抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-Syntaxin 1a(Ser14)  磷酸化突觸融合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

NGAL/Lipocalin 2  脂質(zhì)運(yùn)載蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml 

 


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