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簡(jiǎn)要描述:肉桂醇脫氫酶(CAD)測(cè)試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:無(wú)菌雞血清進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sterile Defidrinated Chicken Blood100毫升BR無(wú)菌豬血清進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sterile Defidrinated Pig Blood100毫升BR無(wú)菌兔血清進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sterile Defidrinated Rabbit Blood100毫升BR無(wú)菌小鼠血清進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sterile De
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:肉桂醇脫氫酶(CAD)測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6926
產(chǎn)品分類:其它系列
商品介紹:
測(cè)定意義: CAD是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一,是木質(zhì)素單體合成反應(yīng)中的最后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應(yīng)的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。 測(cè)定原理: CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
100mL Tris飽和 Tris-Saturated Phenol 常溫避光保存
2 ug pCMV-Tet 3G pCMV-Tet 3G 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
葡萄糖酪胨瓊脂 Dextrose Casein-peptone Agar 250g
25g L- L-Proline 室溫避光保存
明膠生化管 20支/盒
2 g NAC(抗氧化劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
10mL Ethidium Bromide Solution,10mg/mL Ethidium Bromide Solution,10mg/mL 常溫保存
50g 脫脂奶粉(雜交專用) Nonfat Milk Powder 室溫
2 ug pIRES-neo pIRES-neo 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
STAA添加劑 1ml*5支
1瓶 LLC細(xì)胞株 LLC 低溫運(yùn)輸和保存
肉桂醇脫氫酶(CAD)測(cè)試盒紫外分光光度法UBE2J2 泛素蛋白連接J2抗體 規(guī)格: 0.2ml
c-fos c-fos抗體 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-human IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Mouse anti-Bovine IgG ascites 小鼠抗牛IgG腹水 規(guī)格: 1ml
MDMX MDM2樣P53蛋白結(jié)合抗體 規(guī)格: 0.2ml
CPEB1 細(xì)胞質(zhì)多聚苷酸結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CGB 嗜鉻粒素B抗體 規(guī)格: 0.1ml
NF-H/Neurofilament H/Neurofilament 200 高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
COMMD8 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml
MAGEB4 黑色素瘤相關(guān)抗原B4抗體 規(guī)格: 0.2ml
C18orf1 18號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框1抗體 規(guī)格: 0.2ml
TERT 端粒逆轉(zhuǎn)錄抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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