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簡(jiǎn)要描述:葡萄糖6磷酸(6PG)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:麥康凱液體培養(yǎng)基(2015藥典) 英文名稱:MaConkey Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 木糖賴脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基(2015藥典) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 腸道菌增菌液體培養(yǎng)基(顆粒)(2015藥典) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基(2015藥典)(顆粒) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:葡萄糖6磷酸(6PG)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
檢測(cè)方法:可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6622
產(chǎn)品分類:糖酵解系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 6PG (Glucose-6-phosphate,葡萄糖-6-磷酸,又稱6-磷酸葡萄糖),是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產(chǎn)物,廣泛存在于動(dòng)植物體和微生物中。在糖酵解的步反應(yīng)中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過(guò)磷酸葡萄糖異構(gòu)酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續(xù)糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其個(gè)底物,該過(guò)程也是生成NADPH的主要途徑。此外,葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuǎn)化形成糖原或淀粉而被儲(chǔ)存起來(lái)。 測(cè)定原理: 6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化6PG和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,NADPH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色,在450 nm下測(cè)定吸光值。 需自備的儀器和用品: 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
梭菌強(qiáng)化培養(yǎng)基 Reinforced medium for clostridia 250g
30µg 人培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA Human Culture Cell Genomic DNA 4℃保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH9.0 MES Buffer,1.0M,pH9.0 常溫保存
100次 植物種屬鑒定PCR Mix 9(質(zhì)體 trnH-psbA) Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
2 ug pMAL-p5X pMAL-p5X 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
AHM鑒別培養(yǎng)基 AHM Medium 250g
1瓶 RKO-E6細(xì)胞株 RKO-E6 低溫運(yùn)輸和保存
革蘭氏陽(yáng)性菌增菌液 Gram Positive Bacteria Enrichment Broth 250g
1g 3,3’- 二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸 DAB HCl -20℃保存
Elek氏培養(yǎng)基 Elek Medium 250g
30次 一站式CTAB-PAGE電泳套裝
葡萄糖6磷酸(6PG)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法CD10/MME/Neprilysin 金屬肽鏈內(nèi)切抗體 規(guī)格: 0.1ml
HBsAg(H2F4) 人表面抗原單克隆抗體(檢測(cè)) 規(guī)格: 0.1ml
ZAP-70 zeta相關(guān)蛋白70抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSPAN10/Oculospanin 四分子交聯(lián)體10抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PKC gamma (Thr674) 磷酸化蛋白激C亞型G抗體 規(guī)格: 0.1ml
EFHC1 EFHC1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
TReP132/RAPA 抗雌激素抵抗蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Ku-80 DNA修復(fù)Ku-80抗體 規(guī)格: 0.1ml
PHAPI2/APRIL 酸性核磷蛋白32家族B抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-ERK1/MAPK-1/2(Thr183/185) 磷酸化絲裂原活化蛋白激1/2抗體 規(guī)格: 0.1ml
SV2A 突觸泡蛋白2A抗體 規(guī)格: 0.2ml
TEF3/TEAD4 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 規(guī)格: 0.2ml
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