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簡要描述:丙酮酸激酶(PK)測試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:NBB培養(yǎng)基 英文名稱:NBB Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g RaKa-Ray培養(yǎng)基 英文名稱:Raka-Ray Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 1%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 英文名稱:1% Dextrose Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 錳鹽營養(yǎng)瓊脂 英文名稱:Mn2+Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
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實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:丙酮酸激酶(PK)測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6604
產(chǎn)品分類:糖酵解系列
商品介紹:
測定意義: PK(EC 2.7.1.40)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化糖酵解過程中的最后一步反應,是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是產(chǎn)生ATP的關鍵酶之一,因此測定PK活性具有重要意義。 測定原理 PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脫氫酶進一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PK活性。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
100mL 加拿大樹膠 Canada Balsam 室溫避光保存
250mL Veronal Buffered Saline (VBS) Veronal Buffered Saline (VBS) 常溫保存
5mL Tricine-SDS-PAGE上樣液 Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer -20℃保存
2 ug pUC 18 pUC 18 低溫運輸,-20℃保存
30次 柱式石蠟包埋組織DNAout
2 ug pEGFP- C2 pEGFP- C2 低溫運輸,-20℃保存
K1 vitamin K1 1g
2 ug pET-22b(+) pET-22b(+) 低溫運輸,-20℃保存
125mL Saponine Permeating Solution in PBS(皂素PBS滲透液),5X Saponine Permeating Solution in PBS,5X 常溫保存
1 管 Orgami B大腸桿菌 Origami B E.coli Strain -80℃保存
2 ug pROK2 pROK2 低溫運輸,-20℃保存
丙酮酸激酶(PK)測試盒紫外分光光度法phospho-Alpha synuclein (Tyr125) 磷酸化核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml
RAC1+RAC2 GTP結合蛋白RAC1+RAC2抗體 規(guī)格: 0.2ml
TM4SF3 TM4SF3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/RBITC 羅丹明標記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3mlRabbit Anti-Goat IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.3ml
PCDHA9 原鈣粘附蛋白α9抗體 規(guī)格: 0.2mlABHD4 α/β水解4抗體 規(guī)格: 0.2ml
DGCR2 DGCR2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRLBP1L1 結合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GPR49/LGR5 G蛋白偶聯(lián)受體49抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP2R1 細胞色素P450 2R1抗體 規(guī)格: 0.2ml
ER-Alpha 雌激素受體α抗體(用于western blot) 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/PE PE標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
CARD11 凋亡加強結構域蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC34A2 磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG/AP 堿性磷酸(AP)標記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1mlRFESD RFESD蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Hsp93 植物熱休克蛋白93抗體 規(guī)格: 1mlFAM166A FAM166A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
B7-1/CD80 刺激分子B7-1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPSRC1 富含脯/絲卷曲螺旋蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
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