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簡要描述:實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
磷脂酶A2(PLA2)測試盒微量法 | 100管/48樣 | 微量法 | BK-01S6659 |
商品介紹:
測定意義: 磷脂酶A2(EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,廣泛存在于動植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞核分泌物中,參與脂肪消化,精子成熟、細(xì)胞信號傳遞、脂質(zhì)過氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理過程,在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝、參與疾病的病理進(jìn)程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。 測定原理 磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸(HEPC)產(chǎn)生游離巰基,與DTNB反應(yīng)生成黃色物質(zhì),在412nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、超速冷凍離心機(jī)、研缽、可見分光光度計(jì)、微量石英比色皿。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pcDNA3.1(hyg)+ pcDNA3.1(hyg)+ 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基 Potato Agar Medium 250g
100g 麥芽提取物 Malt Extract 室溫保存
50T 腦膜炎病毒多重PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100 mg 5(6)-CFDA Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100mL Bis-Tris Buffer,0.2M,pH7.0 Bis-Tris Buffer,0.2M,pH7.0 常溫保存
20次 Southern Marker DL2000(DIG)
2 ug pGEX-6P-2 pGEX-6P-2 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
美國藥典培養(yǎng)基(USP標(biāo)準(zhǔn))
1瓶 H4-II-E-C3細(xì)胞株 H4-II-E-C3 低溫運(yùn)輸和保存
TSA表面接觸皿55mm 10個每包
磷脂酶A2(PLA2)測試盒微量法Acetyl-Histone H4(K12) 乙?;M蛋白H4抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/APC APC標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml
PHLDA1/TDAG51 T淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白TDAG51抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-rabbit IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-NMDAR2B (Tyr1070) 磷酸化谷受體2B抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
CRYZL1 醌氧化還原樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlPAR-2 蛋白激活受體-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
p22-phox/Cytochrome b245 Light Chain 細(xì)胞色素b245輕鏈抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HP1(Tyr43) 異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體(果蠅) 規(guī)格: 1ml
Clathrin heavy chain/Clathrin HC 網(wǎng)格蛋白重鏈抗體 0.2mlSNX27 SNX27蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
HMGCR 三羥基三甲基輔A還原抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml
BMPER BMP內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCCDC83 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體 規(guī)格: 0.2ml
IgHV/IgH 免疫球蛋白重鏈可變區(qū)抗體 0.2mlphospho-IRS1(Ser312) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CYP27A1 27α羥化抗體 規(guī)格: 0.2mlMLF1 Interacting Protein/PBIP1/KLIP 卡波西氏肉瘤皰疹毒潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
AAT1/C3orf15 3號染色體開放閱讀框15抗體 規(guī)格: 0.2mlNCX2/SLC8A2 鈉鈣交換蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
POLA2 DNA聚合α2抗體 規(guī)格: 0.2mlHAVCR1/TIM1 損傷分子1抗體(甲型毒細(xì)胞受體1) 規(guī)格: 0.1ml
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