簡要描述:α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒微量法公司正在出售的產品:改良鹽緩沖液PSB 英文名稱:Phosphate Saline Buffer,Modified 產品規(guī)格:250g ITC肉湯 英文名稱:ITC Broth 產品規(guī)格:250g CIN-1添加劑 英文名稱: 產品規(guī)格:1ml*5 ITC肉湯添加劑 英文名稱:ITC Broth Additive 產品規(guī)格:1ml*5
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實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!
產品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6571 |
商品介紹:
測定意義: α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調控關鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰。 測定原理 α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和生成琥珀酰、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1個 0.5mLDNA超濾離心管(300-500KD)
10mL 溶液,25mg/mL Chloramphenicol Solution -20℃避光保存
2 ug pOTB7 TOMM70A pOTB7 TOMM70A 低溫運輸,-20℃保存
乳糖-雙岐桿菌鑒定 20支
2 ug pBlueScriptR TTC21B pBlueScriptR TTC21B 低溫運輸,-20℃保存
弧菌檢驗檢驗培養(yǎng)基
10g 二肽 Glycylglycine 室溫干燥保存
50T 甲型流感病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
250mL 消化液(含EDTA) Trypsin Solution -20℃保存
50T 腸道病毒通用型/EV71/柯薩奇病毒A16型3聯(lián)PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
100mL DNTris HCl,1M,pH8.0
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒微量法Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771) 磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml
GCET1 B淋巴細胞生發(fā)中心相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
RNF111 環(huán)指蛋白111抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核轉錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
MBP 髓鞘堿性蛋白(磷脂堿性蛋白)抗體 規(guī)格: 0.1ml
RHCG RH型C糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
ABCD1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗體 0.1ml
TSHR 促甲狀素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
C1orf144 1號染色體開放閱讀框144抗體 規(guī)格: 0.2ml
HEATR7B2 熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-RPS6KB1(Thr 412) 磷酸化核糖體S6蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1ml
ProSAPiP1 含脯突觸相關蛋白相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
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