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查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒微量法

簡要描述:查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:柯氏尿素瓊脂 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g MLCB寒天培地 英文名稱:MLCB Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g GN增菌液(10ml) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10ml*20 H-頂層培養(yǎng)基 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-28
  • 訪  問  量:535

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

檢測方法:微量法

產(chǎn)品貨號:BK-01S6468

產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:

測定意義:

查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是個(gè)被認(rèn)識的黃酮類化合物合成相關(guān)酶,也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。

測定原理:

查爾酮異構(gòu)酶(CHI)催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮,通過測定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

1瓶 P19細(xì)胞株 P19 低溫運(yùn)輸和保存

葡萄糖瓊脂斜面管  20支/盒

100g 氯化鈣,二水 Calcium Chloride, Dihydrate 室溫干燥保存

250mL Triton Permeating Solution in TBS,10X  Triton Permeating Solution in TBS,10X  常溫保存

1mL 胰凝抑制劑溶液,20mg/mL Chymostatin Solution -20℃保存

2 ug pYES2-EGFP pYES2-EGFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

100次 一管式拭子DNAout One-Tube Swab DNAOUT 常溫

2 ug pEGFP- C1 pEGFP- C1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

雙歧桿菌BS培養(yǎng)基 Bifidobacterium BS Medium 250g

50mg 反玉米素 Trans-Zeatin -20℃保存

50T 豬弓形蟲PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒微量法AER61  未知糖基化轉(zhuǎn)移AER61抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Progesterone Receptor(Ser190)  磷酸化孕激素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

LIX1  LIX1抗體 規(guī)格: 0.2ml

KIF2B  有絲分裂驅(qū)動蛋白樣2B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Acetyl-Histone H3(K18)  乙酰化組蛋白H3抗體 規(guī)格: 0.2ml

CAMKK2  鈣調(diào)蛋白激激β抗體 規(guī)格: 0.1ml

FBXO4  FBXO4蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PKR (Thr451)  磷酸化蛋白激R抗體 規(guī)格: 0.1ml

LIF  白抑制因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-rat IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

TCRG  T細(xì)胞受體γ抗體 規(guī)格: 0.2ml

α-Adaptin  銜接蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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