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抗壞血酸氧化酶(AAO)測試盒微量法

簡要描述:抗壞血酸氧化酶(AAO)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:2.5L微需氧產(chǎn)氣包 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 350ml厭氧培養(yǎng)袋 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 SB培養(yǎng)基 英文名稱:SB Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g TB培養(yǎng)基 英文名稱:TB Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2023-12-29
  • 訪  問  量:784

詳細(xì)介紹

商品介紹:

測定意義:

AAO是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白,屬藍(lán)銅氧化酶"家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細(xì)胞壁的代謝和生長有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b還原,該過程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長。

測定原理:

AAO可直接氧化AsA,通過測定AsA的氧化量,可計算得AAO活力。

實驗中所需儀器及設(shè)備:

低溫離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

抗壞血酸氧化酶(AAO)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6393

11.png 

實驗結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

布氏肉湯添加劑 Brucella Broth Additive 2ml*5

100mg 素 B 硫酸鹽 Polymyxin B Sulfate 4℃保存

Littman瓊脂 Littman Agar 250g

20 mg L-Canavanine(iNOS抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250mL E. Coli Lysis Buffer-II,pH7.4  E. Coli Lysis Buffer-II,pH7.4  常溫保存

100mL 去離子甲酰胺 Deionized Formamide 4℃保存

2 ug pINIIIompA pINIIIompA 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

氣單胞菌鑒別瓊脂 Aeromonas Differential Agar 250g

1瓶 L6565細(xì)胞株 L6565 低溫運(yùn)輸和保存

mTSB肉湯 mTSB Broth With Novobiocin 250g

5mg 羧肽 B( 豬胰 ) Carboxypeptidase B  -20℃保存

抗壞血酸氧化酶(AAO)測試盒微量法PSMD10/Proteasome 26S S10  蛋白調(diào)解因子10抗體 規(guī)格: 0.2ml

TRIM35  TRIM35蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

GRASP65  高爾基體外周膜蛋白p65抗體 規(guī)格: 0.2ml

CHKL/Ethanolamine kinase beta  乙醇胺激β抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

TCF9/GCF  轉(zhuǎn)錄因子9抗體 規(guī)格: 0.2ml

TANK  TANK抗體 規(guī)格: 0.1ml

XTP4  毒X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

FRMD2/FRMPD1  FRMD2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

MARCH6  膜相關(guān)環(huán)指蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml

SOAT1/ACAT1  酰基轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.2ml

GLUT1  葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

 


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