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簡(jiǎn)要描述:胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒微量法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產(chǎn)品:含90ml鹽緩沖液均質(zhì)袋 英文名稱:Phosphate Buffered Saline 產(chǎn)品規(guī)格:10個(gè)/包 含225ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 英文名稱:Buffered Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:10個(gè)/包 含900ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 英文名稱:Buffered Peptone Wate
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本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6355 |
商品介紹:
測(cè)定意義: ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。 測(cè)定原理: 利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測(cè)定NADPH濃度的增加。 所需的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
氯化鈉素B肉湯基礎(chǔ)(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g
100g 鹽酸胍 Guanidine Hydrochloride 4℃密封干燥保存
1%TTC溶液 1ml/支*5
1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常溫保存
2 ug pBlueScript SK(-) pBlueScript SK(-) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100g DNCTAB(十六烷基基)
2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
1%聚酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基 1%Tween 80-Corn Agar Medium 250g
1瓶 CCC-HEK-1細(xì)胞株 CCC-HEK-1 低溫運(yùn)輸和保存
腸球菌顯色培養(yǎng)基 1000ml
1mL EDTA溶液,0.2M EDTA Solution -20℃保存
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒微量法ADCY9 苷酸環(huán)化9抗體 0.2mlCAMK1D 鈣調(diào)蛋白激CaMK1D抗體 規(guī)格: 0.2ml
CTGF 結(jié)締組織生因子抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
PLAGL1/ZAC1 多型性瘤基因樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlC17orf42 17號(hào)染色體開放閱讀框42抗體 規(guī)格: 0.2ml
UXT/Ubiquitously expressed transcript 廣泛表達(dá)轉(zhuǎn)錄蛋白UXT抗體 規(guī)格: 0.2mlBEND5 BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
FGF20 成纖維細(xì)胞生因子20抗體 規(guī)格: 0.2mlChloroplast protease 葉綠體蛋白抗體(植物) 規(guī)格: 1ml
CCDC11 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2mlLAMR1 層粘連蛋白受體1抗體(N端) 規(guī)格: 0.1ml
GPR39 G蛋白偶聯(lián)受體39抗體 規(guī)格: 0.1mlGFRA4 GDNF家族受體α-4抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-APBB1 (Ser347) 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-IGF1R(Tyr1280) 磷酸化胰島素樣生因子1受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
BFAR/RNF47 環(huán)指蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Ack1(Tyr284) 磷酸化Ack1抗體 0.1ml
MLF1/2/3 髓細(xì)胞性白蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Rab24(Ser95) 磷酸化ras基因相關(guān)蛋白R(shí)ab24抗體 規(guī)格: 0.1ml
TBX1/Brachyury 先心相關(guān)蛋白TBX1抗體 規(guī)格: 0.2ml
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