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簡要描述:NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法輔酶Ⅰ系列公司正在出售的產(chǎn)品:大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)顆粒 英文名稱:Tryptose Soya Agar 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 改良馬丁培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Martin Medium, Modified 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Sabouraud’s Glucose Broth Mediu
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商品介紹:
測定意義 測定意義: MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。 測定原理: NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6327 |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
大豆酪蛋白消化物吐溫80瓊脂培養(yǎng)基(SCDCPA) 250g
1g 丁酸鈉 Butyric Acid Sodium Salt 室溫干燥保存
胰胨大豆胨固綠瓊脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 250g
10mL 鈣蛋白抑制劑Ⅰ溶液,10mg/mL Calpain InhibitorⅠSolution -20℃保存
2 ug pUB6/V5 His B pUB6/V5 His B 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100mg 消解(溶細(xì)胞)干粉 Zymolase Powder -20℃保存
2 ug pEGM-7ZF(+) pEGM-7ZF(+) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基 Lactobacillus broth Medium 250g
10mg apo- 轉(zhuǎn)鐵蛋白
50T 豬肺炎支原體PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
25mg 無內(nèi)毒素螢火蟲熒光素 Endo-free Luciferin -70℃干燥避光保存
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒微量法Casein 酪蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1ml
PLGF/PIGF (mouse, rat, pig) 胎盤生因子抗體(小鼠、大鼠、豬) 規(guī)格: 0.1ml
CCDC93 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93抗體 規(guī)格: 0.2ml
KCNN4 鈣激活鉀通道蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml
GPA/GYPA/CD235a 型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
CPLA2 beta 胞漿型磷脂A2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-RACGAP1(Ser387) 磷酸化Rho GTP激活蛋白GAP抗體 規(guī)格: 0.1ml
ADAMTS7 整合素樣金屬蛋白與凝1型-7抗體 0.1ml
CD168/RHAMM 透明質(zhì)酸介導(dǎo)細(xì)胞游走受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Blood Group Antigen Precursor 型抗原前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
IRS1 胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格: 0.2ml
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