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簡要描述:NADH氧化酶(NOX)測試盒微量法輔酶Ⅰ系列公司正在出售的產(chǎn)品:改良EC肉湯(mEC+n)顆粒 英文名稱:Modified EC Broth 產(chǎn)品規(guī)格:225ml/袋*10 EC肉湯顆粒 英文名稱:E.Coli Broth 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 SS瓊脂顆粒 英文名稱:SS Agar 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 堿性蛋白胨水顆粒 英文名稱:Alkaline Peptone Wate
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商品介紹:
測定意義 測定意義: NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應密切相關(guān)。 測定原理: NOX能夠?qū)?/span>NADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍色的DCPIP被還原為無色的DCPIP,在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
NADH氧化酶(NOX)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6333 |
實驗結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
0.5mL dGTP溶液,100mM dGTP Solution -20℃保存
2 ug pLKO-Tet-On pLKO-Tet-On 低溫運輸,-20℃保存
改良HC瓊脂 HC Agar,Modified 250g
100mL ADA Buffer,0.5M,pH6.5 ADA Buffer,0.5M,pH6.5 常溫保存
大腸菌群快檢紙片(水源水) Coliform bacteria detective plate 5份/包
1g β- 氨基 β-Aminopropionitrile Fumarate Salt 常溫保存
500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4 Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4 常溫保存
10次 蛋白染色試劑盒 Staining Kit for Phosphate Protein -20℃保存
2 ug pTet-On pTet-On 低溫運輸,-20℃保存
15mL 非凍型尿液DNA保存液 Urine DNALOCKER 室溫
2 ug pDsRed-Mito pDsRed-Mito 低溫運輸,-20℃保存
NADH氧化酶(NOX)測試盒微量法IL5RA/CD125 白介素-5受體α鏈抗體IL-5Rα 規(guī)格: 0.1mlphospho-MEF2C(Ser387) 磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 規(guī)格: 0.1ml
HHEX/HMPH 同源盒蛋白PRH抗體 規(guī)格: 0.1mlGDF15/MIC-1 生分化因子15/巨嗜細胞抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml
C19orf21 19號染色體開放閱讀框21抗體 規(guī)格: 0.2mlAEG-1/LYRIC AEG-1抗體 0.2ml
TGM3 轉(zhuǎn)谷氨酰3抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgM/RBITC 羅丹明標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
Neurturin 神經(jīng)生因子抗體 規(guī)格: 0.1mlLRDD/PIDD 富含亮重復死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
DPP8/DPRP1 二肽基肽8抗體 規(guī)格: 0.2mlGPX3 過氧化3 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml
Apelin receptor/AGTRL1 管緊素樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
PCDHGB1 原鈣粘蛋白γB1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
RALDH2 脫2型抗體 規(guī)格: 0.1ml
IGSF5 免疫球蛋白超家族成員5抗體 規(guī)格: 0.2ml
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